shrna是一种人工合成的rna分子,它有一个紧密的发夹状结构,可以通过rna干扰(rnai)的方式来沉默目标基因的表达。 shRNA的原理是,它可以被细胞内的一种酶叫做Dicer切割成两条siRNA,然后siRNA和一种蛋白叫做RISC结合,形成一个复合物。
2021年9月17日 · (C)shRNA 构建用于插入表达载体(如慢病毒载体)。 两个在RNAi途径的基因沉默中具有实质利害关系的是双链小干扰RNA(siRNA)和基于载体的短发夹RNA(shRNA)。虽然siRNA和shRNA都可用于蛋白沉默,但它们的作用机制有所不同(图2)。
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siRNA(small interfering RNA) 和 shRNA(short hairpin RNA) 是两种常用的 RNA干扰技术,用于沉默目标基因的表达。. 它们的区别主要体现在以下几个方面:. 1. 结构:siRNA是 双链RNA分子,通常由两个互补的短链RNA分子组成,长度约为20-25个核苷酸。. 而shRNA则是一个 …
2023年5月31日 · 本文旨在介绍一些验证shRNA质粒构建有效性的常用方法,并提供相关研究的可靠来源。. 1. 验证方法:. 1.1 Western blot分析:通过检测目标蛋白的表达水平,可以评估shRNA是否成功抑制了目标基因的转录和翻译。. Western blot分析可以使用特异性抗体来检测目标 …
2022年7月11日 · shRNA的RNAi机制与microRNA成熟机制一样,因此,shRNA也可以由聚合酶II型启动子驱动表达。 这类启动子包括广谱启动子(如CMV、CAG和EF1a等)和组织特异性启动子(如hSyn、TBG和cTnT等),可以启动较大的基因转录,且需要polyA等转录终止信号。
shRNA的RNAi机制与microRNA成熟机制一样,因此,shRNA也可以由聚合酶II型启动子驱动表达。 这类启动子包括广谱启动子(如CMV、CAG和EF1a等)和组织特异性启动子(如hSyn、TBG和cTnT等),可以启动较大的基因转录,且需要polyA等转录终止信号。
2023年6月12日 · 以Cre on shRNA为例,该服务是使用FLEX(flip-excision)系统实现shRNA诱导表达。 FLEX是一种非常强大的控制基因表达的方法,它采用2对异质、反向的loxp位点(loxP和 lox2272 ),经过DNA翻转产生带有不同loxp位点的DNA翻转,防止进一步的DNA翻转,实现目标基因不可逆的翻转。
2023年12月4日 · shRNA发挥功能的过程相对复杂,需先将shRNA构建至表达载体,并借助质粒或病毒媒介进入细胞,在细胞内经过转录、剪切、酶切等步骤形成siRNA,进而导致基因沉默,因此shRNA的设计需要遵循以下原则:. 1. shRNA靶点序列的设计和特异性验证与siRNA相同,可参 …
表1 | 几种体外合成siRNA的方法比较. 2) 体内合成. 将所需要的siRNA前体(shRNA)用载体导入目标细胞中,通过细胞内部机制形成成熟的siRNA,最终与AGO-2等蛋白结合形成转录沉默复合物(RISC),达到抑制基因表达的目的。